高中生物知識點 實驗專題3

步    驟

注 意 問 題

分    析

1．提取色素

5克綠葉剪碎，放入研缽，加SiO2、CaCO3和5mL丙酮（或10mL無水乙醇）迅速、充分研磨。（若沒有無水乙醇，也可用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，但要加入適量的無水碳酸鈉，除去水分）

加SiO2

加CaCO3

加丙酮

迅速

加SiO2為了研磨得更充分。

加CaCO3防止研磨時葉綠素受到破壞。因為葉綠素含鎂，可被細(xì)胞液中的有機(jī)酸產(chǎn)生的氫代替，形成去鎂葉綠素，CaCO3可中和液泡破壞釋放的有機(jī)酸，防止葉綠體被破壞。

葉綠體色素易溶于丙酮等有機(jī)溶劑。

減少研磨過程葉綠素的分解，減少有毒性的丙酮揮發(fā)。

2．收集濾液

漏斗基部放一單層尼龍布，研磨倒入漏斗內(nèi)擠壓，將濾液收集到小試管中，用棉花塞塞住試管口。

尼龍布起過濾作用。

試管口用棉花塞塞緊是為了防止丙酮揮發(fā)。

3．制備濾紙條

將干燥的濾紙，順著紙紋剪成長10cm，寬1cm的紙條，一端剪去二個角，并在距這一端1cm處劃一鉛筆線。

干燥

順著紙紋剪成長條

一端剪去二個角

可吸收更多的濾液。

層析時，色素分離效果好。

可使層析液同時到達(dá)濾液細(xì)線。

4．劃濾液細(xì)線

用毛細(xì)吸管吸取少量濾液，沿鉛筆線劃出細(xì)、齊、直的一條濾液細(xì)線，干后重復(fù)三次。

濾液細(xì)線越細(xì)、越齊越好。

重復(fù)三次。

防止色素帶之間部分重疊。

增加色素在濾紙上的附著量，實驗結(jié)果更明顯。

5．紙層析法分離色素

將3mL層析液倒入燒杯中，將濾紙條（劃線一端朝下）插入層析液中，用培養(yǎng)皿蓋蓋上燒杯。

層析液不能沒及濾紙條。

燒杯要蓋培養(yǎng)皿蓋。

防止色素溶解在層析液中，

層析液中的苯、丙酮、石油醚易揮發(fā)。

6．觀察實驗結(jié)果

由上至下分別為：

胡蘿卜素（橙黃色）

葉黃素（黃色）

葉綠素a（藍(lán)綠色）

葉綠素b（黃綠色）

步  驟

注 意 問 題

分 析

一、根尖的培養(yǎng)

實驗前3~4天，讓洋蔥放在廣口瓶上，底部接觸清水。根長約5cm時可用。

置于溫暖處，常換水。

因為細(xì)胞分裂和生長需要水分、適宜的溫度和氧氣。

二、裝片的制作

（解離→漂洗→染色→制片）

1．解離：上午10時至下午2時，剪取洋蔥根尖2~3mm，立即放入盛有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的鹽酸和體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液的混合液（1：1）的玻璃皿中，室溫下解離3~5min。

解離時間要保證，細(xì)胞才能分散開來。

解離時間也不宜過長。

目的：溶解細(xì)胞間質(zhì)，使組織中的細(xì)胞相互分離開來。此時，細(xì)胞已被鹽酸殺死。

否則，根尖過于酥軟，無法取出。

2．漂洗：待根尖酥軟后，用鑷子取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗約10 min。

漂洗要充分，可換水1~2次。

目的：洗去解離液，便于染色。

3．染色：把洋蔥根尖放進(jìn)盛有質(zhì)量濃度為0.01g/mL或0.02g/mL的龍膽紫溶液的玻璃皿中染色3~5min。

染色時間不宜過長，否則顯微鏡下一片紫色，無法觀察。

龍膽紫等為堿性染料，可使染色體著色。

醋酸洋紅溶液也能使染色體著色

4．制片：用鑷子將這段洋蔥根尖取出來，放在載玻片上，加一滴清水，并用鑷子尖把洋蔥根尖弄碎，蓋上蓋玻片，在蓋玻片上再加一片載玻片。然后，用拇指輕輕地壓載玻片，使細(xì)胞分散開來。

要弄碎根尖，再垂直向下均勻用力壓片，不可移動蓋玻片，

目的：使細(xì)胞分散，避免細(xì)胞重疊，便于觀察。做得成功的裝片，標(biāo)本被壓成云霧狀。

三、觀察

1．低倍鏡觀察：把裝片放在低倍鏡

下，慢慢移動裝片，找到分生區(qū)細(xì)胞。

2．高倍鏡觀察：移走低倍鏡，換上高倍鏡，用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋和反光鏡把視野調(diào)整清晰，仔細(xì)觀察，找出處于細(xì)胞分裂期中期的細(xì)胞，再找出前期、后期、末期的細(xì)胞。

一定要找到分生區(qū)。

在一個視野里，往往不容易找全有絲分裂過程中各個時期的細(xì)胞。如果是這樣，可以慢慢地移動裝片，從鄰近的分生區(qū)細(xì)胞中尋找。

分生區(qū)細(xì)胞特點是：細(xì)胞呈正方形，排列緊密，有的細(xì)胞正處于分裂期。